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Operation

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Biacore Operation에서는 System On-Off 및 자가점검 관련 Basic Operation과 더불어, Software 설명, 각 기기별 영문 메뉴얼을 제공하고 있습니다.

biacoreT200

Basic Operation

Software

Maintenance

System On-Off
System Turn on

1. Biacore Main System 을 켠다.
2. Control Computer를 켠다.
3. Running Buffer를 바꾼다. 일반적인 protein-protein interaction의 경우 HBS-EP, HBS-EP+ buffer를 사용한다.
4. 사용할 sensor chip을 넣는다.5. Sensor chip를 docking 한다. 기종마다 docking 메뉴의 위치는 다르며, “Dock” 을 선택하면 된다.
5. Sensor chip를 docking 한다. 기종마다 docking 메뉴의 위치는 다르며, “Dock” 을 선택하면 된다.
6. Prime을 진행한다. 기종마다 prime 메뉴의 위치는 다르며, “Prime”를 선택하면 된다.
7. Prime 후 Immobilization, Kinetics 등의 실험을 수행하면 된다.

System Turn off

1. Biacore Main System 을 켠다.
2. Control Computer를 켠다.
3. Running Buffer를 바꾼다. 일반적인 protein-protein interaction의 경우 HBS-EP, HBS-EP+ buffer를 사용한다.
4. 사용할 sensor chip을 넣는다.
5. Sensor chip를 docking 한다. 기종마다 docking 메뉴의 위치는 다르며, “Dock” 을 선택하면 된다.
6. Prime을 진행한다. 기종마다 prime 메뉴의 위치는 다르며, “Prime”를 선택하면 된다.
7. Prime 후 Immobilization, Kinetics 등의 실험을 수행하면 된다.

bo_1
Fig1. Biacore 3000

bo_2
Fig 2. Bicore X100

bo_3
Fig 3. Biacore T100

시스템 자가점검

1.
기본적으로 System에 문제 있다고 생각이 될 때, 장비의 어느 부분이 문제가 있는지 유저가 스스로 체크해 볼 수 있는 메뉴이다.
2.
전 기종 모두 아무 실험도 하지 않은 새로운 CM5 chip을 docking 한다.
3.
Maintenance kit 에 있는 Bia Test Solution을 꺼낸다. 이때, 각 기종마다 다르니 labeling에 있는 기종 이름을 확인할 것.
4.
Running buffer는 T100는 HBS-N buffer를 준비하고 나머지 기종은 HBS-EP buffer를 준비 한다.
5.
CM5 chip를 Docking 하고, Running buffer를 T100는 HBS-N buffer를, 나머지 기종은 HBS-EP buffer로 연결한다.
6.
Prime을 진행한다. 기종마다 prime 메뉴의 위치는 다르며, “Prime”를 선택하면 된다.
7.
 Prime이 끝난 후에 “System check” 을 클릭한다.

  • Bia2000, 3000 : Test Tools -> System Check
  • BiaX100, T100 : Test Tools -> More Tools -> System Check
8.
System check를 클릭하면, Test solution 을 넣는 Rack의 위치 등에 대한 팝업창이 뜬다. 팝업창에 따라 BIA test solution을 넣고 실행한다.
9.
Test 후 “Ok” 혹은 “Pass” 가 나오면 정상. “Failure” 혹은 “Check!” 가 나오면 그 항목에 관련한 부분이 Hardware적으로 이상이 있다는 의미이다.
10.
 “Failure” 혹은 “Check!” 가 나오면 Desorb 혹은 SuperClean 혹은 Flush를 진행하고 다시 System check를 돌려 본다.
11.
Desorb 혹은 SuperClean 혹은 Flush는 Bia2000, 3000 : Test Tools 부분에 X100, T100 : Tools à More Tools 부문에 위치.
12.
Desorb 혹은 SuperClean 혹은 Flush 를 선택하면 필요한 시약 및 solution 위치에 대한 경고창이 뜨고 경고창에 따라 진행하면 된다.
13.
Desorb 혹은 SuperClean 혹은 Flush 후에 진행한 System check에도 문제가 있다는 메시지가 나오면, GE Healthcare Call center 02-6201-3800으로 문의한다.

 

* 더욱 자세한 내용은 각 기종에 따른 Instrument Hand Book을 참고한다.

기본 실험 가이드

* 기본적으로 Biacore2000, 3000, X100, T100의 경우 원하는 실험을 wizard에서 선택하면, 순서대로 option 들을 선택하게 되고 최종적으로 필요한 sample 및 reagent (EDC/NHS, Regeneration solution 등) volume 들을 알려 주게 된다. 따라서 실험자가 기본적인 실험의 흐름을 알고 있으면 쉽게 접근 할 수 있다.

1.
ligand 는 500ug/ml~ 1mg/ml 정도에 95% 이상 Purity가 요구 된다.
2.
처음 해 보는 Protein일 경우 pH Scouting(Pre-concentration)을 진행한다.
3.
pH Scouting(Pre-concentration)은 Sodium Acetate buffer 4.0, 4.5, 5.0, 5.5 에 ligand 을 각각 50배~100로 dilution하여 진행한다.
4.
Protein의 경우 보통 pH 4.5, 5.0일 경우가 많다.
5.
pH Scouting(Pre-concentration)에서 결정된 ligand의 pH와 dilution 비율을 가지고, Immobilization을 진행한다.
6.
Immobilization은 wizard mode에서 amine coupling kit을 이용하여, amine coupling하여 immobilization하는 것으로 선택한다.
7.
이때, Fc=1 는 Blank로 두고, Fc=2는 immobilizarion할 Target RU를 입력하여 준다.
8.
일반적으로 Target RU는 800RU에서 1200RU 사이로 입력한다. 그러나 Protein 마다 다르므로 한번은 계산해 보는 것이 좋으며, 계산법은 Biacore Basic Lecture 편을 참고한다.
9.
Biacore가 자동으로 지정한 위치에 reagent 들과 sample을 넣고 immobilization을 진행한다.
10.
Regeneration 조건을 알고 있다면, 바로 Kinetics를 진행하며, 알고 있지 않다면 Regeneration kit을 이용하여 wizard에서 Regeneration scouting을 진행한다.
11.
Kinetics는 wizard에서 Kinetics를 선택하고, Analyte 이름 및 kinetics를 진행할 농도를 입력한다.
12.
Analyte가 Protein경우 kinetics는 일반적으로 100nM 부터 serial로 dilution하여 0을 포함하여 5 point 정도 입력한다. 만약 KD value를 알고 있다면 KD 값에 10배 되는 농도부터 dilution한다.
13.
Kinetics Sensorgram이 나오면 evaluation 프로그램으로 fitting하여 ka, kd 값 등을 도출해 낸다.

 

* Protein-Protein interaction 실험의 경우 Biacore Getting Start Kit (BR-1008-36)이 좋은 연습 재료가 될 수 있으므로 이것으로 Self-training 하는 것도 좋은 방법이다.

 

X100 Getting Start Kit (BR-1008-36) matrials
1. b2-microglobulin Antibody (150 kDa) : 1mg/ml
2. b2-microglobulin (11.8kDa) : 100ug/ml 8.5uM
3. HBS-EP+ 10X : 50ml

Basic Operation

Software

Maintenance

Basic Operation

Software

Maintenance

Biacore instrument

Biacore는 정기적인 Maintenance가 필수 입니다.
Maintenance_1

Routine Maintenance

Biacore Maintenace는 3가지가 있습니다.

Maintenance_2

Leakage check points- Daily

Biacore기종마다 다르기는 하지만 해밀턴syringe 부분의 leakage 는 항상 체크하여야 합니다.

 

Maintenance_3

Desorb – Weekly

To clean: Sample tubing and IFC Channels
Desorb에는 다음과 같은 용액이 필요하고, Biacore Maintenance kit 에포함이 되어 있습니다.

Maintenance_4

Desorb and Sanitized – Monthly

To prevent: Microbial growth
To remove: Adsorbed material and disinfect the system

Maintenance_5

Superclean- Monthly

To clean: Flow system and denatures protein to increase their solubility
Maintenance6_수정

System check- Monthly

To check: System performance, using a standard sucrose solution
Maintenance_7

Maintenance_7Maintenance_7_2

Maintenance Schedule

Biacore는 다음과 같은 스케줄표를 따라서 Maintenance를 진행하시면 좋습니다.
Maintenance_8

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